杭州中康瑞源生物科技有限公司

  • 服务热线:4009097985
联系我们

联系方式:

地址:浙江省杭州市钱塘区下沙街道学林街1392号

热线:4009097985

电话:15350114126 (吴经理)

邮箱:1533423978@qq.com

网址:www.hzzkry.com



当前位置: 首页 - 新闻中心

干货分享 | 一文解惑荧光定量PCR实验Ct值

一、Ct值是什么?

qPCR扩增过程中,扩增产物的荧光信号达到设定的荧光阈值时的所对应的扩增循环数(Cycle Threshold)。C为Cycle,T为Threshold。简单讲,Ct值就是qPCR中起始模板扩增达到相对的产物量时,所对应的循环数。

二、为什么要有Ct值?

1、模板量与Ct值的关系:

在PCR指数扩增过程当中,产物量与循环数之间的关系是:扩增产物量=起始模板量×(1+En)循环个数。

2、Ct值的设定:

qPCR扩增产物量是以荧光信号的形式直接呈现,也就是扩增曲线。在扩增过程当中,设定一个荧光信号值,当扩增产物量达到“产物量”时(即达到此荧光阈值时),此时循环数定义为Ct值,需要注意的是,Ct值需要处于指数扩增时期。因此Ct值与起始模板量的关系:模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系。起始模板量浓度越高,Ct值越小;起始模板量浓度越低,Ct值越大。

3、Ct值的重现性

Ct是荧光定量PCR很重要的结果呈现形式,用于基因表达量差异或基因拷贝数的结果计算。一般情况下,复孔Ct值的差值不能大于0.05,不然表明误差结果太大,结果不可信。在PCR早期,扩增处于理想情况下,循环数较少,产物积累少,产生荧光的水平不能与荧光本底背景明显的区别;之后荧光的产生增加进入指数期,此时微小误差尚未放大,Ct值的重现性极好,即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增,得到的Ct值是恒定的。

三、Ct值的范围与影响因素?

1、扩增效率En

PCR扩增效率是指聚合酶把待扩增基因转变生成扩增子的效率。由1个DNA分子转变生成2个DNA分子时的扩增效率为99.9%。扩增效率常用En表示。En是一个非常重要的参数,Ct值可不可信,需要评估En是否正常,En的正常范围为90%-110%之间,影响En的因素有很多,常见的因素如下表:

2、Ct值的范围

Ct值的范围为15-35。但是一般建议对于不同的基因Ct范围,因起始模板量中基因拷贝数和扩增效率不同,需做出该基因的标准曲线,计算出基因的线性检测范围以及En。

3、Ct值异常的原因与解决方案


上一篇:放假通知‖中康瑞源2023年中秋国庆放假通知 下一篇:干货分享 | 比较基因组学、转录组学、蛋白质组学和代谢组学的概念研究方法及其优缺点

电话咨询

4009097985

添加咨询

添加咨询

添加咨询

添加咨询

添加咨询

添加咨询

添加咨询

添加咨询