杭州中康瑞源生物科技有限公司

  • 服务热线:4009097985
联系我们

联系方式:

地址:浙江省杭州市钱塘区下沙街道学林街1392号

热线:4009097985

电话:15350114126 (吴经理)

邮箱:1533423978@qq.com

网址:www.hzzkry.com



当前位置: 首页 - 常见问题

CAR分子构建与慢病毒包装那些你不能错过的知识点

Q1:设计CAR分子时候对如何筛选合适的抗体scFv序列?

Answer

选择用于构建CAR-T细胞的抗体有两个很重要的指标:抗体的特异性和亲和力。特异性决定了所构建CAR-T细胞用于治疗的安全性,亲和力决定了CAR-T细胞的功能。CAR-T细胞构建对所用抗体的亲和力要求并不是越高越好,这一点上不同于抗体药物,而是要有个适当的范围,所以这一点就需要大量的实验来筛选出亲和力适当的抗体scFv序列。


Q2:CAR-T、CAR-NK以及CAR-Macrophage中使用的CAR分子结构上是否有差异?

Answer

用于构建CAR-T的CAR分子一般情况下也适合于构建CAR-NK和CAR-M。但是,目前也有不少针对于NK细胞设计的CAR分子,其主要在共刺激信号分子的使用上不同于CAR-T细胞的CAR分子,例如其使用DAP10和DAP12作为共刺激信号;对于巨噬细胞的CAR分子,其结构中不需要包含共刺激分子只含有CD3ζ信号分子,由于CD3ζ和巨噬细胞Fc受体信号分子的相似性,因此含CD3ζ信号分子的CAR-巨噬细胞也能有效的进行特异性的吞噬作用。

 

Q3:不引入标签的情况下,如何实现CAR-T细胞阳性率的检测?

Answer

目前市面上有应该标记的靶蛋白,可以通过这些靶蛋白标记CAR-T细胞结合流式法来实现CAR-T细胞阳性率的检测;另外,如果有针对CAR蛋白scFv的抗抗体,也可以使用抗抗体来检测。


Q4:CAR慢病毒的滴度需要达到多少才能用于CAR-T细胞构建,除滴度这一指标外,慢病毒还进行哪些指标的检测?

Answer

一般要求活性滴度要大于1×10^8Tu/ml,除滴度这一指标外,一般会进行无菌、支原体以及内毒素等常规检测。


Q5:我们构建的CAR-T细胞阳性率总是过低应该如何解决?

Answer

一方面可以提高慢病毒的质量,例如滴度纯度等;另一方面,可以通过优化转染条件等;再一方面可以通过优化CAR分子的结构,因为CAR分子的结构以及其稳定性都是影响CAR-T细胞阳性率的重要因素。


上一篇:ASD研究有哪些动物行为学评价指标? 下一篇:基因编辑小鼠有什么作用?

电话咨询

4009097985

添加咨询

添加咨询

添加咨询

添加咨询

添加咨询

添加咨询

添加咨询

添加咨询